一、用途介紹：

轉基因檢測試劑盒也叫轉基因植物蛋白檢測試劑盒系用特異性抗 Cry1C 單抗包被的微孔板和酶標記抗 Cry1C 單抗，雙抗體夾心法檢測 Cry1C 基因表達產物，可以高靈敏度和特異性的檢測轉基因植物中的 Bt-Cry1C 蛋白。

二、組份（規格）

預包被板（抗 Cry1C 單抗）：12 孔×8

Cry1C 酶標抗體：12 ml×1 瓶

20×濃縮洗滌液 ：30 ml×1 瓶

5×抽提液/稀釋緩沖液：30 ml×1 瓶

底物液 A：7 ml×1 瓶

底物液 B ：7 ml×1 瓶

終止液 ：7 ml×1 瓶

使用說明書：1 份

0ppb 陰性對照：1ml

3 個不同濃度的標樣：

0.6 ppb，2.5 ppb，6.0 ppb：各 1ml

三、技術參數：

轉基因檢測試劑盒適用于玉米、棉花、大豆以及其各種農作物中轉基因成分的快速定量測試。

四、試劑準備：

試劑盒中的 20×濃縮洗滌液 30 ml 加 570 ml 滅菌 ddH2O 溶解稀釋至 1×洗滌液，5×抽提液（30 ml）加 120 ml ddH2O 稀釋至 1×抽提液，4℃存放備用。

五、樣品準備：

稱取約 20 mg 葉片，加 0.5 ml 1×抽提液（使用前 30 min 放置室溫）研磨至勻漿，室溫放置 30 min，測定前把樣品上清液稀釋 5-20 倍。

測定莖干和胚乳中的 Bt 蛋白時，樣品稱取約 40 mg，加 1 ml 1×抽提液研磨。

六、ELISA 反應：

1. 依次加 100 μl 陰性對照，標準品（3 個不同濃度的標樣： 0.6 ppb，2.5 ppb，6.0 ppb）和待測樣品至 96 孔板；

2. 用封口膜蓋住 96 孔板，快速搖動平板混勻樣品；

3. 37℃恒溫箱孵育 30 min；

4. 倒掉 96 孔板中液體，每孔加入 1×洗滌液 250 μl 洗滌微孔板，洗板 5 次，用吸水紙拍干；

5. 按順序在每個小孔中加入 100 μl Cry1C-酶標抗體，然后重復步驟 2；

6. 37 ℃恒溫箱孵育 30 min；

7. 倒掉 96 孔板中液體，每孔加入 1×洗滌液 250 μl 洗滌微孔板，洗板 5 次，用吸水紙拍干；

8. 依次加入 50 μl 底物 A 液，50 μl 底物 B 液，重復步驟 2；

9. 37 ℃恒溫箱孵育 10 min，加 50 μl 終止液，充分混勻終止反應，15 min 以內在酶標儀上讀取結果。 在 450 nm 為主波長，630 nm 為次波長（或單波長 450nm）下，用空白孔校零，再讀取各孔 OD 值。

七、使用注意事項：

1. 測定中需使用的所有試劑和 96 孔板提前 30 min 放置室溫溫育（否則會影響試驗準確性），注意 12 連管必須溫育后再從平板上取下，未使用完的預包被板條應置于有干燥劑的封口袋中密封保存；

2. 試劑使用前應充分搖勻；

3. 搖動平板混勻時注意避免樣品之間交叉污染；

4. 使用洗滌液漂洗時，洗滌液需要填滿每個小孔，進行充分漂洗；

5. 研磨好的樣品如果不能一次全部測量，可以暫時在 4 ℃避光保存，但是最好在 24 h 內測定；

6. 結果判讀請在反應終止后 15 min 內完成。

八、Bt 蛋白濃度計算公式：

Bt 蛋白濃度（μg/g）=

九、儲存條件及有效期：

轉基因檢測試劑盒儲存于 2-8℃，切勿凍存；未開封試劑盒有效期 12 個月，開封后 3 個月內用完。（見包裝盒上標簽有效期）

更新日期：2023-12-8